染色體原位雜交-武漢貝科新肽公司
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武漢貝科新肽科技有限公司
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原位雜交技術(In situ hybridization,ISH)是分子生物學、組織化學及細胞學相結合而產生的一門新興技術,始于20世紀60年代。1969年美國耶魯大學的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細胞雜交,將該基因進行定位,與此同時Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相繼利用同位素標記核酸探針進行了細胞或組織的基因定位,從而創(chuàng)造了原位雜交技術。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發(fā)展,特別是20世紀70年代末到80年代初,分子、質粒和噬菌體DNA的構建成功,染色體原位雜交,為原位雜交技術的發(fā)展奠定了深厚的技術基礎。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發(fā)展起來的一種非性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.

和其它實驗方法一樣,必須同時設對照試驗以證明其實驗結果特異性。對照試驗的設置須根據(jù)核酸探針和靶核苷酸的種類和現(xiàn)有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點是它的高度特異性,它可測定組織、培養(yǎng)的單個細胞或細胞提取物中的核苷酸含量。應用高敏感度的性標記cRNA探針在理想的ISHH的實驗條件下檢測mRNA,其敏感度可達到20個mRNA拷貝/每個細胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性,在用ISHH定位DNA時很少發(fā)生丟失,降解,其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上,有時甚至在組織切片上的單個基因拷貝。正因為如此,對ISHH結果的解釋應持慎重態(tài)度,特別是前人未報告過的新發(fā)現(xiàn)。

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